紅細(xì)胞裂解液主要包括植物、動(dòng)物、微生物基因組DNA的提取與鑒定,哺乳動(dòng)物組織總RNA的提取與鑒定,質(zhì)粒DNA的提取與鑒定,PCR擴(kuò)增,分子雜交技術(shù),限制性內(nèi)切酶消化,分子克隆全過(guò)程和基因文庫(kù)的構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的原理及步驟。經(jīng)過(guò)過(guò)濾滅菌處理,主要用于流式細(xì)胞分析時(shí),裂解液和組織中的紅細(xì)胞。也可以用于核酸純化時(shí)裂解紅細(xì)胞。
紅細(xì)胞裂解液的取用規(guī)則:
?。?)試劑不能與手接觸。
?。?)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后,應(yīng)將工具洗凈(藥勺要擦干)后,方可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后將瓶放回原處
?。?)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)。
紅細(xì)胞裂解液的注意事項(xiàng):
1、制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,不一定要制備成單細(xì)胞懸液。
2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作,盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。
3、離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。
4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于:常規(guī)步驟多了一步洗滌過(guò)程的離心,可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過(guò)程,洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。
5、離心洗滌后,通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。
6、如果經(jīng)過(guò)處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取,在處理細(xì)胞時(shí)不必使用DEPC處理的溶液,即無(wú)需在該操作中特意去除RNase。
7、為了安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。